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如何處理PCR反應(yīng)中的污染？

PCR反應(yīng)的特點(diǎn)是具有較大擴(kuò)增能力與靈敏性，但令人頭痛的問(wèn)題是易污染，極其微量的污染即可造成假陽(yáng)性的產(chǎn)生。那么我們?cè)撊绾翁幚鞵CR反應(yīng)中的污染呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、環(huán)境污染1.稀酸處理法：對(duì)可疑器具用1mol/L鹽酸擦拭或浸泡，使殘余DNA脫嘌呤。2.紫外照射（UV）法：紫外波長(zhǎng)（nm）一般選擇254/300nm,照射30min即可。需要注意的是，選擇UV作為消除殘留PCR產(chǎn)物污染時(shí)，要考慮PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度與產(chǎn)物序列中堿基的分布，UV照射僅對(duì)500bp以上長(zhǎng)片段有效，對(duì)...

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磁珠法核酸提取過(guò)程中的常見誤區(qū)有哪些？

磁珠法核酸提取是傳統(tǒng)DNA提取方法wu法比擬的，那么在磁珠法核酸提取過(guò)程中的常見誤區(qū)有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、磁珠越多，提取效果越好磁珠的主要特點(diǎn)是既可以分散于液體中，也可以在外加磁場(chǎng)作用下以固態(tài)方式和液相分li任何試劑體系，磁珠和液體的比例都應(yīng)該是有一定閾值的，超過(guò)一定的比例，過(guò)多的磁珠將因?yàn)闊o(wú)法均勻分散于液體中，而喪失其分散的特性，也使得洗滌過(guò)程中無(wú)法充分增加核酸磁珠和液體接觸的效率。而過(guò)量的磁珠也會(huì)吸附更多的雜質(zhì)，對(duì)于除雜的效果影響非常大。甚至有些時(shí)候，過(guò)多的磁...

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蛋白質(zhì)提純的注意事項(xiàng)和常見問(wèn)題有什么？

在進(jìn)行任何一種蛋白質(zhì)純化的時(shí)候，都要時(shí)刻注意維護(hù)它的穩(wěn)定性，保護(hù)它的活性，那么你知道蛋白質(zhì)提純的注意事項(xiàng)和常見問(wèn)題有什么嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、注意事項(xiàng)：1、操作盡可能置于冰上或者在冷庫(kù)內(nèi)進(jìn)行。2、濃度不要太稀，蛋白濃度維持在μg/mL～mg/mL。3、選擇合適的pH，除非是進(jìn)行聚焦層析，所使用的緩沖溶液pH避免與pI相同，防止蛋白質(zhì)的沉淀。4、使用蛋白酶抑制劑，防止蛋白酶對(duì)目標(biāo)蛋白的降解；在純化細(xì)胞中的蛋白質(zhì)時(shí)，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA對(duì)蛋白的污染。5、避免...

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你知道WB實(shí)驗(yàn)操作步驟有哪幾步嗎？

蛋白質(zhì)印跡(Westernblotting)：又稱為免疫印跡，根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合，半定量檢測(cè)樣品中的某種蛋白的方法。基本原理是通過(guò)特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過(guò)分析條帶的位置和條帶深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況。那么你知道WB實(shí)驗(yàn)操作步驟有哪幾步嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！一、樣本制備蛋白提取1.前期準(zhǔn)備：首先要了解你所研究蛋白的內(nèi)源表達(dá)水平，常用的數(shù)據(jù)庫(kù)如Uniport、Atlas、BioGPS，或查閱相關(guān)文獻(xiàn)。設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照...

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細(xì)胞培養(yǎng)基的滅菌及儲(chǔ)存方法有哪些？

不同的培養(yǎng)基由于其營(yíng)養(yǎng)成份不同，滅菌方式和儲(chǔ)存方法也可能不同。那么細(xì)胞培養(yǎng)基的滅菌及儲(chǔ)存方法有哪些呢？讓我們一起來(lái)看看吧！一、不同細(xì)胞培養(yǎng)基的除菌方式及注意事項(xiàng)某些培養(yǎng)基（如MEM）可進(jìn)行高壓滅菌，這類培養(yǎng)基一般不含有L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉，一般是在培養(yǎng)基高壓滅菌后才加入。另外可用耐高壓的谷氨酸鹽（如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺）代替L-谷氨酰胺?？筛邏簻缇呐囵B(yǎng)基在121℃、15psi，15分鐘的條件下wan全可達(dá)到滅菌效果及營(yíng)養(yǎng)成分的最小損失，不需將滅菌時(shí)間延長(zhǎng)。絕大多數(shù)細(xì)胞...

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